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qGC-MS代谢组为什么要进行衍生化?
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气相色谱仅适用于沸点低、热稳定性好的小分子物质的分离分析,对沸点高、挥发性低、热稳定性差、极性强甚至极易挥发的物质往往不能直接进样分析。生物样本中含有大量的羟基、胺基、羧基、巯基等官能团的物质信息,因此采用适当的衍生化处理方法对于样品的分离分析往往起着十分重要的作用。
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q非靶代谢组如何选质谱平台?GC还是LC
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代谢物分布广、性质差异大,单靠一种分离分析手段难以进行无偏向的全面分析,应根据样品的性质及研究目的来选择并综合利用多种技术平台。根据两个平台的灵敏度和偏好性,可以根据研究关注目的进行选择。植物代谢物主要分为初生代谢物与次生代谢物两大类。进行初生代谢研究时,大多使用GC-MS,进行次生代谢研究时,大多使用LC-MS,而LC-MS使用的物质范围则相对更为广泛一些。
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qGC-MS和LC-MS有什么区别?
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一个是气质联用,一个是液质联用,主要的区别在于色谱情况不同,气质联用用的是气象色谱,液质联用用的是液相色谱。这两个平台都是测小分子代谢物的,但是偏向性有些不一样,主要还是仪器不同和数据库不同造成的。GC-MS比较偏向一些易挥发,不稳定,极性比较小的物质;LC-MS呢比较偏向一些极性比较大的物质,不易挥发的。但是从经验来看,目前做动物或者临床样本,LC-MS做的多一些,测到的物质也会多一些。
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q组织样本是怎么收集的?
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动物组织和临床标本的话,取完之后,去除结缔组织,PBS冲洗,然后可以剪碎分装,一般200mg左右就够了,-80保存。干冰寄送。
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q血清样本是怎么收集的?
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血清样本一般对操作要求比较高,切记不能溶血,需要采集完全血后,静置分层,然后吸上清(千万不能多吸),吸完上清之后离心,转速不能太大,一般3000-5000转左右,离心完之后分装,-80保存,干冰寄送。
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q没有高速离心机,血清样本准备时,可以不做12000rpm离心吗?
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可以的,只需要在送样时备注一下未进行高速离心,我们会在做样本前处理前可以帮您做这一步离心。
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q细胞样本准备,需要加淬灭剂吗?
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淬灭剂的作用是尽快固定细胞内的代谢物,理论上加淬灭剂会比不加效果好一点,如果您那边不方便配制淬灭剂,也可以参考咱们无淬灭剂方法准备样本。