利用液相色谱质谱联用技术(LC-MS/MS)结合数据库检索的方法,对样本中的混合蛋白进行定性鉴定分析。
- Pull-down、Co-IP产物的质谱分析
- 蛋白混合物的SDS-PAGE胶内酶解(in-gel digestion)的质谱分析
▶ 产品类型
蛋白胶条鉴定
▶ 仪器平台
Orbitrap系列, Thermo/Tims TOF Pro2, Bruker
▶ 搜库软件
Proteome Discoverer / MaxQuant
▶ 胶条样本
考马斯亮蓝染色SDS-PAGE凝胶,条带清晰可见
条带切取操作过程中佩戴手套,防止角蛋白污染
条带置于EP管中,-20℃保存,冰袋运输
▶ Proteomics Analysis of Formalin Fixed Paraffin Embedded Tissues in the Investigation of Prostate Cancer
期刊: Journal of Proteome research
影响因子: 4.074
技术方法: SDS-PAGE +LC-MS/MS
▶ 研究内容
福尔马林固定石蜡包埋(formalin fixation and paraffin embedding, FFPE)组织是大规模研究的宝贵资源,但由于蛋白质的交联,其在蛋白质组学中的应用受到了限制。本研究对FFPE组织蛋白质组学分析方案进行了优化,并在FFPE-前列腺癌(PCa)临床标本上进行了初步应用。使用七种蛋白质提取方案处理FFPE小鼠组织,利用SDS电泳和高分辨率LC-MS/MS对蛋白质组的提取效果进行评价。然后对FFPE和匹配的新鲜冷冻(FF)组织样本使用优化的方案处理分析,结果表明蛋白质鉴定有大量重叠,且相对丰度有很强的相关性(rs=0.819,p<0.001)。对10例PCa患者及邻近良性病变的FFPE组织进行处理分析,发现蛋白质在癌组织和癌旁良性组织之间的调节失控,反映了前者的翻译、肽合成和蛋白质代谢的增加,这与文献相符。综上所述,这些结果支持蛋白质组学在PCa背景下的相关性发现以及优化的FFPE材料蛋白质组学分析方案的可靠性。
▶ Identification and Quantification of Major Faba Bean Seed Proteins
期刊: Journal of Agricultural and Food Chemistry
影响因子: 4.192
技术方法: 蛋白定性鉴定
▶ 研究内容
蚕豆(Vicia Faba L)因其蛋白质含量高而在人类和动物营养中占有重要地位。然而,需要更好地了解其种子蛋白质组成,才能开发出满足市场对具有特定品质属性的植物蛋白质需求的品种。在本研究中,作者使用一维电泳(1D SDS-PAGE)筛选了35种不同的蚕豆基因型,对三个基因型的35条主要蛋白带进行了质谱分析。MS分析表明,大多数分析的蛋白质条带包含一种以上的蛋白质类型,总共鉴定出100多种蛋白质。这些蛋白质包括主要的种子贮藏蛋白,如豆科蛋白以及其他蛋白质类,如脂氧合酶、热休克蛋白、蔗糖结合蛋白、白蛋白和防御素。本文介绍的种质资源和筛选方法有望有助于选择高蛋白质含量和高质量的品种。
▶ 研究成果