载体构建(vectorconstruction)是分子生物学研究常用的手段之一。主要包括已有载体多克隆位点(MCS)的改造和已有载体启动子、增强子、筛选标记等功能元件的改造。理想的运载体是质粒(plasmid),载体构建即是构建含外源DNA的质粒。分子克隆方法有两类:双酶切法和In-Fusion 法。
表达载体(Expression vectors)就是在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件(如启动子、RBS、终止子等),使目的基因能够表达的载体。
过表达载体是将目的基因构建入相应载体,用于实现在实验中瞬时或稳定高表达目的基因。
1、 拥有丰富的内切酶和空载体质粒。
2、 插入片段的大小范围宽。
3、 可通过一个反应将一个或多个片段快速、定向地插入到载体的任何位置。
4、 两种方法可供选择,常规克隆可选择较低成本的双酶切法,非常规克隆可选In-Fusion法。
1、 需提供目的基因序列及测序报告
2、 空载体质粒及图谱信息
实验报告(含基本步骤、电泳结果、测序结果和酶切鉴定)
质粒
菌株
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